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薄層色譜點樣選購指南、操作技巧、注意事項（一）

山東朱氏藥業(yè)集團有限公司2022/10/20 8:58:08

薄層色譜點樣

點樣方法

點樣除另有規(guī)定外，用點樣器點樣于薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊2.0cm，樣點直徑及點間距離同紙色譜法，點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。點樣直徑不超過5mm，點樣距離一般為1~1.5cm即可。樣品在溶劑中的溶解度很大，原點將呈空心環(huán)——環(huán)形色譜效應(yīng)。因此配制樣品溶液時應(yīng)選擇對組分溶解度相對較小的溶劑。點樣方式有點狀點樣和帶狀點樣。




怎樣提高點樣效率?

點樣是造成TLC定量誤差的主要來源。實驗證明：定量毛細(xì)管更適合較小體積的點樣；微量注射器更適合較大體積的點樣。這主要是因為微量注射器受小氣泡、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。為避免不同定量毛細(xì)管間的點樣誤差、建議一塊薄層板上*好用同一只定量毛細(xì)管。但應(yīng)注意更換樣品時，應(yīng)將毛細(xì)管用超1聲bo或不同極性溶劑清洗干凈。在制備樣品時，溶樣溶劑黏度不能過高，以便于點樣；溶劑沸點過低則進樣體積易變，過高則會改變展開劑組成；對樣品溶解度過高會使樣點發(fā)生空心現(xiàn)象；常用的溶劑為甲醇、乙醇、**。經(jīng)典TLC樣點原點一般為直徑3mm點間距1--2cm 底邊距1.5cm；HPLC樣點原點一般為直徑1mm點間距5mm 底邊距1cm。

不同溶劑對樣品的洗脫能力不同，因此在點樣的同時，樣品在原點開始呈環(huán)形展開，如果樣品在溶劑中的溶解度很大，原點將變成空心環(huán)，Kaiser稱這種現(xiàn)象為“點樣環(huán)形色譜效應(yīng)”。這種效應(yīng)對隨后的線形展開造成不良影響，因此配制樣品溶液時應(yīng)選用對組分溶解度相對較小的溶劑；溶劑的粘度不宜過高，以便于點樣，溶劑的沸點要適中，沸點過低由于揮發(fā)會改變樣品溶液濃度導(dǎo)致較大誤差，沸點過高，樣品溶液的溶劑會在原點殘留，導(dǎo)致改變展開劑的選擇性，特別是樣品溶液的溶劑與展開劑的極性相差較大時更為明顯，*常用的溶劑為甲醇及乙醇，有時也用丙酮。點樣后必須將溶劑**除去后再進行展開，但要避免高溫加熱，以免改變待測成分的性質(zhì)。（長沙德之瑞儀器科技有限公司定量毛細(xì)管）

點樣方式、點樣量及點樣設(shè)備的選擇決定于分析的目的、樣品溶液的濃度及被測物質(zhì)的檢出靈敏度。

點樣體積經(jīng)典薄層一般為1-5μl，高效薄層為100-500nl，樣品溶液濃度一般在0.01％-1.00％范圍內(nèi)，點樣過多會造成原點“超載”，展開劑產(chǎn)生“繞行”現(xiàn)象使斑點拖尾或重疊，使掃描峰形不對稱或不能基線分離，并由于超載得到非線性的校正曲線，嚴(yán)重影響定量結(jié)果，降低準(zhǔn)確度。

經(jīng)典薄層的原點直徑*大不得超過5mm，一般3mm較為合適，高效薄層原點直徑約為1-2mm，盡可能避免多次點樣，原點直徑過大會降低分辨率及分離度。

經(jīng)典薄層起始線距底邊約1.5cm，高效薄層為1cm，展距前者為10-15cm，后者為5-7cm，對于難分離的化合物用多元展開劑展開時，注意原點與展開劑的距離每次要保持一致，否則由于色譜分離*初行為的差異而導(dǎo)致分離失敗。

點與點的間距經(jīng)典薄層為1-2cm，高效薄層為0.5cm，用具自動換行功能的薄層掃描儀時，斑點之間的距離必須十分**，才能正確地掃描每行的色斑，得到好的測定結(jié)果，圖7-3-1為一般的點樣圖解。

在點樣前，應(yīng)將薄層板在日光及紫外光下檢查板面有無損壞或污染，選擇合格的薄層板后決定用點狀點樣還是用帶狀點樣。為此，瑞士CAMAG公司生產(chǎn)了系列點樣設(shè)備以供選用，這些設(shè)備只適用于硬板。下面是常用的點樣方式及設(shè)備。 （長沙德之瑞儀器科技有限公司定量毛細(xì)管）




（一）點狀點樣




如果僅僅為了定性，用內(nèi)徑約0.5mm管口平整的毛細(xì)管或微量注射器將樣品溶液點在距薄層底邊約2cm處，點樣直徑不超過5mm，點間距約為1-1.5cm即可。




為進行定量，借毛細(xì)作用吸樣的定容管有兩種，一是容積為0.5、1、2、3、4及5μl的德之瑞定量毛細(xì)管（Microcaps），另一種是100及200nl的鉑銥合金定量毛細(xì)管（Nanopipette）；注射器式的可變體積的點樣器有50-230nl的毫微點樣器（Nano-Applicator）及0.5-2.3μl的微量點樣器（Micro-Applicator），用于需要調(diào)節(jié)體積及沒有毛細(xì)作用的鍵合相薄層的點樣。




毛細(xì)管式的微量點樣器裝在手動的Nanomat型點樣裝置的磁性點樣頭上，點樣頭裝在彈簧上。按下此點樣頭，毛細(xì)管借恒定的壓力接觸薄層表面。點間距離由帶準(zhǔn)確的#44 間隔的E字形缺刻裝置控制，CAMAG Nanomat Ⅲ型手動點樣器，適用于普通或高效薄層板，點樣體積**，樣品原點小，原點間隔定位準(zhǔn)確；注射器式的毫微點樣器及微量點樣器由測微尺控制，也可與Nanomat型點樣裝置配合，以使點樣位置**。




電動的Nanomat Ⅲ型點樣裝置完全適用于上述**點樣器的配套使用，并且還可以自動控制點樣次數(shù)，點樣器在薄居上的停留時間，以及點樣器接觸薄層的速度。還可避免手持毛細(xì)管點樣時的用力不勻，由于靠機械控制接觸板面，壓力恒定。此外，還有可以用于環(huán)形展開及向心展開的薄層點樣裝置。