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實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒途徑和技術(shù)-1

山東朱氏藥業(yè)集團(tuán)有限公司2022/10/23 6:18:48

<(一)經(jīng)口(胃腸道)染毒>







在毒理學(xué)試驗(yàn)中染毒途徑的選擇，應(yīng)盡可能模擬人在接觸該受試物的方式。*常用的染毒途徑為經(jīng)口、經(jīng)呼吸道；經(jīng)皮及注射途徑。染毒的途徑和方法根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康�、�?shí)驗(yàn)動(dòng)物種類和藥物劑型等情況確定。不同途徑的吸收速率，一般是靜脈注射>吸入>肌內(nèi)注射>腹腔注射>皮下注射>經(jīng)口>皮內(nèi)注射>其他途徑(如經(jīng)皮等)

(一)經(jīng)口(胃腸道)染毒

常用有喂飼、灌胃和吞咽膠囊等方式。

1．喂飼 將受試物摻人動(dòng)物飼料或飲水中供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自行攝人。如果受試物是完全**的，則在飼料中的*高含量可為5％，一些有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的食物成分物質(zhì)則可更高，但應(yīng)注意不要造成飼料營(yíng)養(yǎng)成分失衡而影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育。喂飼法符合人類接觸受試物的實(shí)際情況，但缺點(diǎn)多，如適口性差的受試物，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物拒食；易揮發(fā)或易水解的受試物不適用。而且，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)單籠喂飼，以食物消耗量計(jì)算其實(shí)際染毒劑量。

2．灌胃 將受試物配制成溶液或混懸液，以注射器經(jīng)導(dǎo)管注入胃內(nèi)。一般灌胃深度從口至劍突下。*好是利用等容量灌胃法，即受試物配制成不同濃度，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物單位體重的灌胃容量相同。外源化學(xué)物用溶劑稀釋，一般講濃溶液比稀溶液毒性大，但是也有的外源化學(xué)物稀釋之后毒性反而增加，即存在所謂“稀釋毒性”，其原因尚不清楚。因此在發(fā)現(xiàn)有稀釋毒性時(shí)等濃度灌胃法也可接受。灌胃前應(yīng)禁食空腹，大鼠隔夜禁食，小鼠可禁食4h(因小鼠消化吸收和代謝速度較快)，均不停飲水。灌胃后2—4h提供飼料。經(jīng)口多次染毒，一般不禁食，但應(yīng)每日定時(shí)染毒。灌胃法適用小鼠、大鼠、兔、犬等動(dòng)物，優(yōu)點(diǎn)是劑量準(zhǔn)確，缺點(diǎn)是工作量大，并有傷及食管或誤入氣管的可能。

(1)小鼠灌胃法；左手拇指和食指捏住小鼠頭部?jī)啥笃つw，無(wú)名指或小指將尾部緊壓在手上，使小鼠腹部向上。右手持灌胃管(1～2ml注射器上連接以14號(hào)注射針頭，**磨鈍，稍加彎曲的灌胃管)，灌胃管長(zhǎng)4～5cm，直徑約lmm。操作時(shí)，經(jīng)口角將灌胃管插人口腔，用胃管輕壓小鼠頭部，使口腔和食管成一直線，再將胃管沿上腭壁輕輕插入食管內(nèi)，當(dāng)推進(jìn)約2～3cm左右時(shí)，灌胃管前端約到達(dá)膈肌水平(體重20g左右的小鼠)，此時(shí)可稍感有抵抗。如此時(shí)動(dòng)物無(wú)呼吸異常，即可將藥注入。如遇阻力或動(dòng)物憋氣則應(yīng)抽出重插管。如誤插入氣管注藥時(shí)可引起動(dòng)物立即死亡。藥液注完后輕輕退出胃管。操作時(shí)宜輕柔，以防損傷食管及膈肌。

(2)大鼠灌胃法：灌胃法與小鼠相似。采用的灌胃管長(zhǎng)約6～8cra，直徑約為1．2mm，**磨鈍。插管時(shí)，為防止插人氣管，應(yīng)先抽回注射器針?biāo)�，無(wú)空氣抽回說(shuō)明不在氣管內(nèi)，即可注藥。

(3)犬和家兔灌胃法：由2人操作，將犬關(guān)人特制犬籠，并移動(dòng)活動(dòng)?xùn)�，擠犬并使之固定，持犬者兩手握住犬耳后及頸部皮膚，使犬頭部朝上頸部拉直。灌胃者用一木棍讓犬咬住，將硬質(zhì)胃管自木棍與上腭之間插入食管，約20cm左右即下達(dá)到胃腔(插入深度可預(yù)先在體外測(cè)量好，并做好記號(hào))；持兔者端坐兩腿夾住兔軀干及其后肢，兩手握住兔耳及前肢，將兔頭朝上，使兔頸部拉直。灌胃者用開口器通過(guò)兔口角(在犬齒后)之空隙，將開口器向下轉(zhuǎn)動(dòng)數(shù)次，使兔舌伸出。開口器的孔應(yīng)放置在口腔正中央，將硬質(zhì)胃管通過(guò)開口器小孔插入食管，約10－15cm左右即下達(dá)到胃腔。如胃管進(jìn)人胃內(nèi)，動(dòng)物較安靜，無(wú)掙扎、氣促等表現(xiàn)，應(yīng)先抽回注射器針?biāo)�，無(wú)空氣抽回說(shuō)明不在氣管內(nèi)，即可用注射器推入藥液，再推入2～3mi水，以送人留滯在胃管內(nèi)的藥液，灌胃完畢，迅速抽出胃管，然后取出木棍或開口器。

3．吞咽膠囊 將一定劑量的受試物裝入膠囊中，放至犬的舌后部，迫使動(dòng)物咽下，此法劑量準(zhǔn)確，適用于易揮發(fā)、易水解和有異味的受試物。

<(二)經(jīng)呼吸道染毒>




經(jīng)呼吸道染毒可分為吸入染毒和氣管內(nèi)注入。

1．靜式吸人染毒 將一定數(shù)量的嚙齒類動(dòng)物放在密閉的染毒柜中，加人易揮發(fā)的液態(tài)受試物或氣態(tài)受試物使成一定濃度。靜式吸入染毒簡(jiǎn)易，但缺點(diǎn)較多，主要是隨試驗(yàn)進(jìn)行氧分壓降低(因此，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量有限制)，柜內(nèi)受試物濃度也逐漸下降(由于動(dòng)物吸人消耗、為被毛及染毒柜壁吸附所致)，而且實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有經(jīng)皮吸收的可能。染毒時(shí)間一般為2h。要求受試物在lOmin內(nèi)蒸發(fā)完畢。

柜頂蓋部有三個(gè)附件。一個(gè)是投藥孔，在孔下方用多層紗布或?yàn)V紙作為接受和蒸發(fā)液態(tài)受試物的藥物蒸發(fā)器；一個(gè)是用于混勻蒸氣或氣體的小電扇；一個(gè)是插人溫度計(jì)的孔。在柜的下部的1／4處還留有一個(gè)供采樣的孔。

靜式吸人染毒時(shí)應(yīng)根據(jù)染毒柜容積和染毒時(shí)間，確定放置的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)，以**動(dòng)物的*低需氣量(表1—4)。染毒柜所需容積也可按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物總體重(kg)×100×染毒時(shí)間h)來(lái)估算，相當(dāng)于動(dòng)物每kg體重每小時(shí)所需空氣體積為100L。

靜式吸入染毒多以計(jì)算方法得到染毒柜內(nèi)受試物濃度，受試物濃度以mg／m．易揮發(fā)液體化學(xué)物計(jì)算公式為

C＝(a·d·l000)／L

式中：C＝設(shè)計(jì)的染毒濃度(mg億)；a＝加入受試物的量(m1)；L：染毒柜容積(L)。

氣態(tài)化學(xué)物加入為m1數(shù)，可依據(jù)染毒柜容積折算為ppm。單位mg／ml：

記算公式為(式中MW為受試物的分子量)：mg／m3＝(MW·ppm)／22.4

可在染毒期內(nèi)測(cè)定受試物濃度2～3次，以其均值作為實(shí)際染毒濃度。

表1—4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的*低需氣量及不同染毒柜容積應(yīng)放置的動(dòng)物數(shù)(染毒2h)