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熱原檢查采用家兔法

山東朱氏藥業(yè)集團(tuán)有限公司2022/11/5 17:21:45

《中國藥典》二部采用家兔法檢查熱原,將一定劑量的供試品靜脈注入家兔體內(nèi),在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀察家兔體溫升高的情況,以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。給家兔注射一定量的熱原后,一般15～30分鐘體溫開始上升,70～120分鐘達(dá)到*高峰。檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性取決于試驗(yàn)動(dòng)物的狀況、實(shí)驗(yàn)室條件和操作的規(guī)范性。

(一)試驗(yàn)動(dòng)物

熱原檢查的試驗(yàn)動(dòng)物為家兔,應(yīng)符合:①健康合格,體重1.7kg以上,雌兔應(yīng)無孕。預(yù)測(cè)體溫前7日應(yīng)用同一飼料喂養(yǎng),在此期間內(nèi),體重應(yīng)不減輕,精神、食欲、排泄等不得有異�，F(xiàn)象。②對(duì)未曾用于熱原試驗(yàn)的家兔;或供試品判定為符合規(guī)定,但組內(nèi)升溫達(dá)0.6℃的家兔;或3周內(nèi)未曾使用的家兔均應(yīng)在試驗(yàn)前3～7日內(nèi)預(yù)檢體溫,進(jìn)行挑選。挑選試驗(yàn)條件與檢查供試品時(shí)相同,僅不注射藥液,每隔30分鐘測(cè)溫1次,連續(xù)測(cè)4小時(shí),共測(cè)8次。4小時(shí)內(nèi)各兔體溫均在38.0~39.6℃,且*高*低溫差不超過0.4℃者,方可供試驗(yàn)用。③凡熱原試驗(yàn)用過的家兔,如供試品判為符合規(guī)定,至少休息48小時(shí)后可重復(fù)使用。其中升溫達(dá)0.6℃的家兔應(yīng)休息2周以上。④如熱原檢查不合規(guī)定時(shí),則組內(nèi)**家兔不能再使用。每一家兔的使用次數(shù),用于一般藥品的檢查應(yīng)不超過10次。

(二)檢查前的準(zhǔn)備工作

實(shí)1.每批供試品初試用3只,復(fù)試用5只家兔。在檢查前1～2日,供試用家兔應(yīng)分別為能處于同一溫度的環(huán)境中,實(shí)驗(yàn)室和飼養(yǎng)室的溫度相差不得大于3℃,實(shí)驗(yàn)室的溫度0.4℃、 在17～25℃,在試驗(yàn)全過程中,應(yīng)注意室溫變化不得大于3℃,應(yīng)防止動(dòng)物騷動(dòng)并避免解聲干擾。

2.家兔在試驗(yàn)前至少1小時(shí)開始停止給食,并置于寬松適宜的裝置中,直至試驗(yàn)

完畢。測(cè)量家兔體溫應(yīng)使用精密度為±0.1℃的測(cè)溫裝置。測(cè)溫探頭或肛溫計(jì)插人

的深度和時(shí)間各兔應(yīng)相同,深度一般約6cm,間不得少于1分半鐘,每隔30分鐘測(cè)量體溫1次,一般測(cè)量2次,兩次體溫之差不得超過0.2℃,以此兩次體溫的平均值作為1兔的正常體溫。當(dāng)日使用的家免,正常體溫應(yīng)在38.0～39.6℃,且同組各兔間正常體肛門內(nèi)之差不得超過1℃。

3.試驗(yàn)用的注射器、針頭及一切和供試品接觸的器皿,應(yīng)置烘箱中于250℃加熱2.分鐘,或用180℃加熱2小時(shí),也可用其他適宜的方法除去熱原。

(三)檢查方法

1.測(cè)家兔正常體溫后15分鐘內(nèi),自耳靜脈緩緩注入規(guī)定劑量并溫?zé)嶂良s38可采用供試品溶液,然后每隔30分鐘測(cè)量體溫1次,連續(xù)測(cè)6次。

2.每只兔的正常體溫與注射供試品溶液后6次測(cè)量體溫中*高的體溫之差即為該兔體溫的升高溫度。

(四)結(jié)果判定

1.符合下列情況者,判為符合規(guī)定在初試3只家兔中,體溫升高均低于0.6℃,并且3只家兔體溫升高總和低于1.3℃;或在復(fù)試的5只家兔中,體溫升高0.6℃或0.6℃以上的家兔不超過1只,并且初試、復(fù)試合并8只家兔的體溫升高總和為3.5℃或3.5℃以下。

2.有下列情況之一者,復(fù)試一次3只家兔中1只體溫升高0.6℃或0.6℃以上;3只家兔升溫均低于0.6℃,但3只家兔升溫總和達(dá)1.3℃或1.3℃以上。

3.有下列情況之一者,判為不符合規(guī)定在初試3只家兔中,體溫升高0.6℃或0.6℃以上的家兔超過1只;或在復(fù)試的5只家兔中,體溫升高0.6℃或0.6℃以上的家兔超過1只;或在初試、復(fù)試合并8只家兔的體溫升高總和超過3.5℃。

4.出現(xiàn)負(fù)值的規(guī)定如下當(dāng)家兔升溫為負(fù)值時(shí),均以0℃計(jì)。

(五)注意事項(xiàng)

1.建議應(yīng)盡量使用熱原測(cè)溫儀測(cè)溫,因?yàn)槠涓袦靥筋^在整個(gè)測(cè)溫過程中都置于兔門內(nèi),兔較安靜,所測(cè)體溫較正確,同時(shí)也避免了給藥后1小時(shí)、2小時(shí)、3小時(shí)測(cè)溫這項(xiàng)規(guī)定造成的漏檢現(xiàn)象。

2.熱原的耐熱性能良好,60℃加熱1小時(shí)不被分解破壞,100℃不降解,但180℃3-4小時(shí)、200℃60分鐘或250℃30～45分鐘可使熱原**破壞。因此耐熱物品如玻璃制品、金屬制品、生產(chǎn)過程中所用的容器和其他用具以及注射時(shí)使用的注射器等,均可采用此法破壞熱原。

3.熱原實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外應(yīng)保持安靜,避免強(qiáng)烈直射的日光或燈光及其他刺激。室溫應(yīng)為17～25℃,且在**試驗(yàn)過程中,室溫變化不得大于3℃

4.有的供試品如腺苷三磷酸二鈉注射時(shí)要注意速度應(yīng)緩慢,否則易造成家兔死亡。

5.試驗(yàn)過程中,要及時(shí)填寫兔卡及原始記錄。